İstiridyə göbələyi lakkase NRC 620-nin istehsalı və biokimyəvi xarakteristikası və alma şirəsinin təmizlənməsində səmərəliliyinin qiymətləndirilməsi.

28°C-də 25 günlük statik inkubasiyadan sonra *Pleurotus ostreatus* NRC620-dən alınan lakkaza göbələk becərmə mühitində ən yüksək aktivlik göstərdi. Bu ferment üçün optimal pH və temperatur dəyərləri müvafiq olaraq 3.0 və 70°C idi. 40°C və 50°C-də 2 saatlıq inkubasiyadan sonra ferment aktivliyi müvafiq olaraq 68.33% və 59.61% olaraq qaldı. Sitrat-fosfat buferində (pH 7.0) 2 saatlıq inkubasiyadan sonra ferment aktivliyi 100% olaraq qaldı. 10 mM MgSO₄ və CuSO₄ əlavə edilməsi ferment aktivliyini müvafiq olaraq təxminən 21% və 35% artırdı, NaCl, MnCl₂, KCl və CaCl₂ isə ferment aktivliyini inhibə etdi. ABTS-i substrat kimi istifadə edərkən, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 lakkazının kinetik parametrləri (Km və Vmax) müvafiq olaraq 1,99 mM və 16,217 μmol min−1 L−1 təşkil etmişdir. Alma şirəsi nümunələrinin fermentativ müalicəsi həm pH-ı, həm də özlülüyü əhəmiyyətli dərəcədə azaltdı və bu azalma saxlama müddətinin artması ilə əlaqəli idi. Lakkaz müalicəsi alma şirəsinin ümumi fenol tərkibində bir qədər azalma ilə nəticələndi, lakin antioksidan aktivliyində heç bir azalma müşahidə edilmədi.
Son illərdə tədqiqatçılar qida sənayesində yaşıl biotexnologiyanın tətbiqinə diqqət yetirirlər. Lakkase qida sənayesində ən faydalı fermentlərdən biridir və şirə emalı, çörəkçilik, şərabın stabilləşdirilməsi və qida məhsullarının orqanoleptik keyfiyyətlərinin yaxşılaşdırılması kimi sahələrdə tətbiq tapır.¹Bir çox ali bitkilər və mikroorqanizmlər laksaza ifraz edir,²və deuteromisetlər, askomisetlər və basidiomisetlər kimi göbələklər də lakkaza istehsal edə bilər.³Lakkase (EC 1.10.3.2) üç fərqli mis atomundan ibarət sistem istifadə edərək molekulyar oksigeni suya çevirən və bununla da müxtəlif fenolik birləşmələri və aromatik aminləri oksidləşdirən mavi oksidazadır. Meyvə və tərəvəz şirələrinin istehsalı zamanı fermentativ və qeyri-fermentativ qaralma kritik məsələlərdir.⁴Bu maddələr şirənin rənginə, dadına və ətrinə mənfi təsir göstərdiyindən, onlar çıxarılmalıdır.⁵
Bütün meyvələr arasında alma dünyada və Avropa Birliyində ən çox istehlak edilən meyvədir. 2019-cu ildə alma istehsalı 87 milyon tonu keçərək qlobal miqyasda üçüncü yeri tutub.⁶Almaların tərkibində çoxsaylı fenolik birləşmələr, o cümlədən flavonoidlər və kofein turşusu və xlorogen turşusu kimi fenolik turşular var.⁷Alma şirəsi adətən şəffaf formada istehlak edildiyi üçün, süzülmə prosesi zamanı fenol komponentlərinin təxminən 50%-dən 90%-ə qədəri itir.⁸Bu gün istehlakçılar, polifenol tərkibi yüksək olan bulanıq alma şirəsi kimi minimal emal olunmuş məhsulları seçməyə meyllidirlər. Lakin, yüksək fenol tərkibinə görə bu növ alma şirəsi rəng dəyişikliyinə və tündləşməyə xüsusilə həssasdır.⁹Alma şirəsinin qaralmasını azaltmaq və ya qarşısını almaq üçün müxtəlif texnologiyalar, o cümlədən 60-90°C-də pasterizasiya kimi istilik emalı üsulları istifadə olunur.¹⁰Ancaq Sauceda-Gálvezin araşdırmasına görə¹¹, termal emal uçucu kimyəvi maddələri məhv edə və alma şirəsinin orqanoleptik keyfiyyətlərinə təsir göstərə bilər. Termal emal üsullarına alternativlər superkritik karbon qazı, ultrabənövşəyi şüalanma, ultrasəs, yüksək hidrostatik təzyiq və ya yüksək təzyiqli homogenləşmədir.¹²Bu texnologiyaların səmərəliliyi və uyğun meyvə şirələrinin məhsuldarlığı istifadə olunan parametrlərdən və məhsulun xüsusiyyətlərindən asılıdır. Onların geniş yayılması yüksək xərclər, bəzi qida məhsullarının keyfiyyətinə mənfi təsirlər və ya fermentlərin qeyri-kafi inaktivasiyası ilə məhdudlaşır.^13,14
Lakkase meyvə şirəsini sabitləşdirmək və aydınlaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər.¹⁵Gökmen və digərləri.¹⁶Meyvə şirəsinin təmizlənməsi üçün lakkazdan istifadəni tövsiyə edirəm, çünki o, fenol birləşmələrini istənilən ultrafiltrasiya membranı tərəfindən asanlıqla çıxarılan polimerlərə və ya oliqomerlərə çevirərək effektiv şəkildə aradan qaldırır və alma şirəsinin 50°C-də altı həftəyə qədər sabit rəng və şəffaflıq saxlamasına imkan verir. Təmizlənmiş *Trichoderma* lakkazı alüminium oksid muncuqları üzərində immobilizasiya edilmiş və alma şirəsinin mikrob çirklənməsi nəticəsində yaranan dadsız birləşmələri selektiv şəkildə təmizləmək üçün istifadə edilmişdir.¹⁷
Alma şirəsinin uçucu komponentlərinin təxminən 80-90%-i efirlər və aldehidlərdir ki, bu da şirəyə unikal bir ətir verir.¹⁸*Trametes versicolor* bitkisindən alınan lakkase alma şirəsini təmizləmək üçün gənc hindistan cevizi qabıqlarından alınan təbii lifdən hazırlanmış ucuz bir dayaq üzərində hərəkətsizləşdirildi.¹⁹Əvvəlki tədqiqatlar alma şirəsinin stabilləşməsini (rəng və bulanıqlıq) fermentsiz və ya immobilizasiya metodlarından istifadə etməklə və ya ultrafiltrasiya ilə birlikdə araşdırmışdır.^5,19Lakin, saxlama zamanı göbələk lakkazalarının alma şirəsinin fiziki-kimyəvi xüsusiyyətlərinə təsiri hələ də aydın deyil. Buna görə də, bu tədqiqatın məqsədi göbələk lakkazaları ilə müalicədən və iki həftəlik soyuducuda saxlamadan sonra alma şirəsinin fiziki-kimyəvi xüsusiyyətlərindəki, fenol birləşmələrinin tərkibindəki və antioksidan aktivliyindəki dəyişiklikləri eksperimental olaraq araşdırmaq idi. Lakkazalar fenol birləşmələrini oksidləşdirmək qabiliyyətinə malikdir ki, bu da onları müxtəlif sənaye proseslərində, o cümlədən şirə təmizlənməsində istifadə üçün perspektivli edir. Bu tədqiqatda *Pleurotus ostreatus* NRC 620-dən alınan lakkazalar araşdırılmış və onların aktivliyi və şirə təmizlənməsində effektivliyi üçün ideal şəraitə diqqət yetirilmişdir. İstiridyə göbələkləri (P. ostreatus NRC 620) üzərində aparılan tədqiqatlar hələ də məhdud olsa da, əvvəlki tədqiqatlarda Trametes versicolor və Ganoderma lucidum kimi müxtəlif göbələk mənbələrindən alınan fermentlər araşdırılmışdır. Bu tədqiqatın məqsədi bu fermentin qida sənayesində potensial tətbiqini qiymətləndirmək və onun unikal xüsusiyyətlərini, xüsusən də ideal pH və temperaturunu vurğulamaq idi.
2,2′-Azooksibis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfon turşusu) (ABTS) Sigma-Aldrich (Kanada) şirkətindən alınmışdır. Digər bütün reagentlər analitik dərəcəli idi.
Milli Tədqiqat Mərkəzinin Mikrob Kulturası Kolleksiyası Mərkəzi məlum istiridyə göbələyi NRC620 ştammını əldə etdi. Subkulturadan sonra bu ştamm 4°C-də kartof dekstroz ağarının əyrilərində saxlanıldı. İnokulumun hazırlanması üsulu belə idi: 10 günlük, tam inkişaf etmiş miselyum kartof dekstroz ağar lövhələrinə inokulyasiya edildi və 28°C-də inkubasiya edildi. 10 gündən sonra steril metal yumruq istifadə edərək aqar mühitindən üç 12 mm diametrli miselial blok çıxarıldı və əvvəllər Othman və digərləri tərəfindən təsvir edildiyi kimi 50 ml sterilizasiya edilmiş mədəniyyət mühiti (pH 5.0) olan pambıq tıxacları olan 250 ml Erlenmeyer kolbalarına yerləşdirildi.²⁰). Kulturalar 28°C-də 18 gün inkubasiya edildi. Daha sonra kulturalar Whatman № 1 filtr kağızından süzüldü və nəticədə yaranan supernatant ferment mənbəyi kimi xidmət etdi.
Lakkaza aktivliyi substrat kimi ABTS istifadə edilərək təyin edilmişdir. Reaksiya qarışığı (2 ml) 500 μL 0,3 mM ABTS (0,1 M natrium sitrat buferində həll edilmiş, pH 4,5) və distillə edilmiş su ilə seyreltilmiş lazımi miqdarda ferment nümunəsindən ibarət idi.^21,22Lakkazanın otaq temperaturunda (28 °C ± 2) ABTS-i oksidləşdirə biləcəyini nəzərə alaraq, ABTS-in oksidləşməsi 420 nm-də (ε) absorbsiya artımını ölçməklə təyin edilmişdir.₄₂₀= 36.000 sm^-1 M ^-1) Agilent Carry-100 UV spektrofotometrindən istifadə etməklə. Dəqiqədə 1 μmol ABTS-i oksidləşdirmək üçün bir vahid lakkaza aktivliyi tələb olunurdu. Zülal konsentrasiyası daxili nəzarət kimi mal-qara serum albuminindən istifadə edərək Bradford metodu ilə təyin edildi.^23,24
Ferment NRC 620 istiridyə göbələyi ştammından əldə edildikdən sonra, onun aktivliyi 28 °C-də statik şəraitdə 25 gün ərzində müxtəlif becərmə intervallarında ölçüldü.
Temperaturun lakkaza aktivliyinə təsirini öyrənmək üçün 20 ilə 90 °C arasında temperatur diapazonunda təcrübələr aparılmışdır. Ferment əlavə edilməzdən və reaksiyaya başlamazdan əvvəl bufer (0,1 M natrium sitrat, pH 4,5) və substrat (ABTS) qarışdırılmış və müxtəlif temperaturlarda 5 dəqiqə inkubasiya edilmişdir. Fermentin istilik stabilliyi müvafiq olaraq 40, 50, 60 və 70 °C-də 2 saat ərzində 0,05 M natrium fosfat buferində (pH 7,0) inkubasiya yolu ilə qiymətləndirilmişdir. Daha sonra qalıq aktivlik ABTS substratı istifadə edilərək qiymətləndirilmişdir.
pH-ın lakkaza aktivliyinə təsiri, pH diapazonu 2,5 ilə 7,0 arasında olan 0,1 M sitrat-fosfat buferlərində substrat kimi ABTS istifadə edilərək qiymətləndirilmişdir. Ferment məhlulu pH sabitliyini qiymətləndirmək üçün 40°C-də iki saat ərzində 0,1 M sitrat və Tris buferlərində (pH 3, 4, 6 və 7) inkubasiya edilmişdir. Substrat kimi ABTS ilə qalıq aktivlik inkubasiyadan sonra hesablanmışdır.
Lakkaza, müvafiq olaraq 2,5 mM və 10 mM konsentrasiyalarında müxtəlif metal ionları (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+ və Mn2+) ehtiva edən natrium fosfat buferində (0,05 M, pH 7,0) 10 dəqiqə inkubasiya edildi. Daha sonra reaksiyanı başlatmaq üçün substrat (ABTS) əlavə edildi və nisbi aktivlik qiymətləndirildi.
Kinetik parametrləri (Vmax və Km) təyin etmək üçün müxtəlif konsentrasiyalarda (0,025–3 mM) lakkaza ilə ABTS oksidləşməsi pH 4,5-də ölçülmüşdür. Kinetik^sabitlərMichaelis-Menten tənliyinin əmsalları, reaksiya sürətinin substrat konsentrasiyasının funksiyası kimi əksini göstərən Lineweaver-Burk qrafikindən istifadə edilərək hesablanmışdır. Kinetik sabitlər GraphPad Prism 6.01 versiyası proqram təminatından istifadə edərək Lineweaver-Burk qrafikindən hesablanmışdır.
Almalar kran suyu ilə yaxşıca yuyulduqdan sonra, onlar iki yerə bölündü və tam avtomatik Braun MP80 alma şirəçəkənindən (Almaniyada istehsal olunub) istifadə edərək şirəsi sıxıldı. Şirə dörd qat pendirdən süzüldü. Nəzarət qrupuna heç bir ferment əlavə edilmədi, təzə hazırlanmış alma şirəsinə isə 2,0% lakkaza (sınaqdan keçirilmiş ən effektiv konsentrasiya) əlavə edildi və daha sonra iki həftə ərzində 4°C-də saxlanıldı.
Titrlənə bilən turşuluq (TA) və pH Boulton və digərlərinin metoduna əsasən təyin edilmişdir.^al.27Hər nümunənin pH dəyəri rəqəmsal pH metri (JENWAY 3510 pH metr) ilə ölçülmüşdür. Titrlənə bilən turşuluq (TA) aşağıdakı düsturdan istifadə edərək alma turşusu əsasında hesablanmışdır.
Burada V və C müvafiq olaraq titrləmədə istifadə olunan natrium hidroksid məhlulunun həcmi (ml) və konsentrasiyasıdır (0,1 mol/L). K alma turşusunun çevrilmə əmsalıdır və 0,067-yə bərabərdir, W isə alma şirəsinin kütləsidir (q).
Ümumi həll olan bərk maddələr (^TDS) bütün şirə nümunələrinin tərkibi PAL-1 cib refraktometrindən (ATAGO, Tokio, Yaponiya) istifadə edilərək müəyyən edilmişdir. Hər ölçmədən sonra optik linza deionlaşdırılmış su ilə yuyulmuş və hər alma şirəsi nümunəsi üç dəfə sınaqdan keçirilmişdir. Hər nümunə üçün dəyər üç ölçmənin ortalaması ilə hesablanmışdır. Hər alma şirəsi nümunəsi üçün orta ± standart sapma da bu nəticələrin ortalaması ilə hesablanmışdır.
Alma şirəsi nümunələrinin özlülük elastikliyi fırlanma viskozimetri (RV, Rheotest 2, Almaniya) istifadə edilərək qiymətləndirilmişdir. Nümunə viskozimetrin “S2” silindrinin içinə yerləşdirilmişdir. Görünən özlülük, kəsmə gərginliyi və kəsmə sürəti əyrisinin meylliliyi ilə təmsil olunmuşdur ki, bu da müxtəlif kəsmə sürətlərində (1.00-dan 437.4 s⁻¹-ə qədər) kəsmə gərginliyi və müvafiq əyrilərdən hesablanmışdır. Görünən özlülüyün hesablanması düsturu aşağıdakı kimidir:
Burada η görünən özlülük (cP), τ kəsmə gərginliyi (dyn/sm²), γ kəsmə sürəti (san⁻¹) və (τ) aşağıdakı düsturla fırlanma momenti (α) və silindr (Z) dəyərlərindən istifadə etməklə hesablanır: τ = Z . α.
Qaşınma indeksi Meidav ​​və s. metoduna əsasən təyin edilmişdir^al.2910 ml-lik şirə nümunəsi 2750 xg-də 10 dəqiqə ərzində santrifüj edildi. 5 ml şirə supernatantı 5 ml 95% etanol ilə qarışdırıldı. Qarışığın absorbsiyası Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) istifadə edərək 420 nm-də ölçüldü.
Ümumi fenol tərkibi (TPC), Boulton və digərləri tərəfindən təsvir edildiyi kimi Folin-Ciocalteu reaktivindən istifadə edərək kolorimetrik olaraq təyin edildi.^[27]0-dan 500 mq/L-ə qədər konsentrasiyalar üçün qallik turşusunun standart əyrisi qurulmuşdur (^r²= 0.997). Nəticələr qallik turşusu ekvivalentləri (mq GAE/ml) kimi ifadə olunur.
25 μL alma şirəsinə 125 μL distillə edilmiş su və 2850 μL FRAP məhlulu əlavə edin və qarışığı qaranlıq yerdə saxlayın.³⁰dəq. Daha sonra Shimadzu UV spektrofotometrindən (UV-1601 PC) istifadə edərək 593 nm-də absorbsiyanı ölçün. FRAP reaktivi 300 mM asetat buferini (pH 3.6), 20 mM dəmir(III) xloridini və 10 mM 2,4,6-tris(2-piridil)triazini (TPTZ) (40 mM HCl-də həll olunmuş) 10:1:1 nisbətində qarışdırmaqla hazırlanmışdır. Standart əyri Trolox istifadə edərək yaradılıb (^R²= 0.999), nəticələr isə μM Trolox/ml kimi ifadə olunur.
Emal olunmuş və emal olunmamış şirələrin antioksidan aktivliyi, DPPH sərbəst radikallarını təmizləmək qabiliyyətini qiymətləndirmək üçün DPPH metodundan istifadə etməklə müəyyən edilmişdir.³¹On mikrolitr şirə metanolda 1 ml DPPH məhlulu (100 μM) ilə qarışdırıldı. Qaranlıqda 30 dəqiqə reaksiya aparıldıqdan sonra qarışığın absorbsiyası Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) istifadə edərək 517 nm-də ölçüldü. Nəticələr kalibrləmə əyrisinə əsasən troloks ekvivalentləri (μM troloks/ml) kimi ifadə edildi (_^R2= 0.990).
Əldə edilən məlumatlar göstərir ki, NRC 620 istiridyə göbələklərində fermentasiyanın 18-ci gününün sonunda maksimum lakkaza istehsalı müşahidə edilmiş və 1302 U/L aktivliyə çatmışdır. Bu, lakkaza istehsalı üçün optimal becərmə vaxtının müəyyən edilməsi üçün əsas olmuşdur (Şəkil 1). Ferment istehsalı artan becərmə müddəti ilə artsa da, artım tempi becərmə vaxtı ilə birbaşa mütənasib deyildi; 21 gündən sonra ferment aktivliyi cəmi 90 U/L artmışdır (1390 U/L-ə qədər). Buna görə də, məhsul məhsuldarlığını artan becərmə müddətinin iqtisadi faydaları ilə balanslaşdırmaq üçün optimal becərmə müddəti kimi sonda 18 gün seçilmişdir.
Pleurotus ostreatus NRC 620-də becərmə müddətinin lakkase məhsuldarlığına təsiri. Üç (12 mm) göbələk miseli bloku 50 ml steril mühitə inokulyasiya edilmiş və sonra 28 °C-də müxtəlif vaxtlarda becərilmişdir.
Digər tədqiqatlarla uyğun olaraq, nəticələrimiz göbələklər tərəfindən lakkaza ifrazının pik həddinə çatmaq üçün ideal becərmə dövrünün 7 ilə 36 gün arasında olacağını göstərir.³²Ezike və digərlərinə görə.³³, *Trametes polyzona* WRF03, fermentasiyanın doqquzuncu gününün sonunda 1637 U/mq zülal spesifik aktivliyi ilə ən yüksək miqdarda lakkaza istehsal etmişdir. Bundan əlavə, Othman və digərləri.³⁴*Trichoderma harzianum* S7113-ün beşinci becərmə günündə çox miqdarda laksa ifraz etdiyi aşkar edildi. Laksa istehsal sürəti on dördüncü gündə pik aktivliyə çatdı və sonra tədricən azaldı.³⁴Ferment ifrazı əsas böyümə mərhələsində də baş verə bilsə də, adətən aralıq mərhələdə pik həddə çatır və karbon və ya azot mənbəyinin istehlakı ilə tetiklenir.^34,35
Pleurotus ostreatus NRC 620-dən götürülmüş lakaza 50°C-dən 80°C-yə qədər geniş temperatur diapazonunda yüksək aktivlik göstərsə də, pik aktivliyə (69–98%) yaxınlaşsa da, onun maksimum aktivliyi 70°C-də müşahidə edilmişdir (Şəkil 2a). Bu temperatur diapazonundan kənarda ferment aktivliyi təxminən 70°C-də azalmışdır. Bu nəticələr fermentin yüksək temperaturda aktiv olduğunu göstərir, çünki yüksək temperatur reaksiyanın kinetik enerjisini artırır.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620-də reaksiya temperaturunun (a) və pH-ın (b) lakkaza aktivliyinə təsiri. Ferment əlavə edilməzdən və reaksiyaya başlamazdan əvvəl qarışığı 5 dəqiqə müxtəlif temperaturlarda əvvəlcədən inkubasiya etməklə 20 ilə 90 °C arasında dəyişən temperatur əldə edilmişdir. pH-ın lakkaza aktivliyinə təsiri, 2,5 ilə 7,0 arasında pH diapazonunda 0,1 M sitrat-fosfat buferi olan məhlullarda substrat kimi ABTS istifadə edilərək qiymətləndirilmişdir.
Ezike və s. görə^al.33, *Trametes polyzona* WRF03 lakkase üçün optimal temperatur 55 °C-dir ki, bu da *Ganoderma lucidum* üçün olan temperaturla eynidir.^laccase36və *Trametes polyzona* KU-RNW02737 üçün optimal temperatura (50 °C) bənzərdir^lakkase . ^Baldrian38qeyd edir ki, digər liqnini parçalayan ferment sistemlərində olduğu kimi, lakkaza üçün ideal temperatur aralığı 50 ilə 70 °C arasındadır.
Nəticələr göstərdi ki, ferment pH 3.0-da ən yüksək aktivlik nümayiş etdirir və pH 3.5-də 94%-ə çatır. Lakin, 2.5-dən 7.0-ə qədər geniş pH diapazonunda aktiv qalmışdır (Şəkil 2b). Bundan əlavə, neytral və ya qələvi şəraitlə müqayisədə turşu şəraitində daha yüksək aktivlik nümayiş etdirmişdir. Onun aktivliyi 2.5-dən 4.5-ə qədər pH diapazonunda ən azı 77% qalmışdır, lakin pH 7.0-də yalnız təxminən 38%-ə çatmışdır. *Trametes polyzona* WRF03-dən alınan lakkaza üçün optimal pH 4.533 idi ki, bu da *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40 və *Trametes hirsuta* 41-dən alınan lakkazalar üçün pH ilə eynidir. Lakin, Chairin və digərlərinin tədqiqatına görə...⁴², *Polymorpha f. sp.* WR710-1-dən alınan lakkaza üçün optimal pH 2.2-dir, *Polymorpha f. sp.* IBL-04-dən alınan lakkaza üçün optimal pH isə 5.043-dür. Hidroksid anionlarının (lakkaza inhibitoru) T2/T3 lakkazasının mis atomlarına bağlanması neytral və ya qələvi pH şəraitində lakkaza aktivliyinin azalmasının səbəbi ola bilər. Bu, T1 mərkəzindən T2/T3 mərkəzinə daxili elektron ötürülməsini poza bilər və bununla da^{məhdudlaşdırıcı}ferment aktivliyi 23,44
Fermenti müxtəlif temperaturlarda inkubasiya etməklə həm inkubasiya müddətinin, həm də temperaturun fermentin sabitliyinə təsir etdiyi aşkar edilmişdir. Xüsusilə, *Trametes polyzona* NRC 620-dən alınan lakkaz 40℃ və 50℃-də daha yüksək sabitlik nümayiş etdirmiş və 120 dəqiqədən sonra müvafiq olaraq ilkin aktivliyinin 68,33% və 59,61%-ni saxlamışdır (Şəkil 3a). Bunun əksinə olaraq, eyni şərtlər altında (40℃ və 50℃, 120 dəqiqə), *Trametes polyzona* WRF03-dən alınan lakkaz aktivliyinin müvafiq olaraq 64,38% və 42,92%-ni saxlamışdır.³³Əksinə, inkubasiya müddətinin və temperaturun artması *Trametes polyzona* NRC 620 lakkazının stabilliyini azaltdı; 60℃ və 70℃-də 60 dəqiqə inkubasiyadan sonra onun aktivliyi müvafiq olaraq 39,24% və 1,72%-ə düşdü (Şəkil 3a). Təcrübə nəticələrinə uyğun olaraq, *Trametes polyzona* WRF03-dən alınan lakkaz istilik emalı prosesi boyunca 40 və 50℃-də daha yüksək stabillik göstərdi.³³Eynilə, Lueangjaroenkit və s.^al.37və Sədr və s.^al.42Trametes polyzona KURNW027 və Trametes polyzona WR710-1-dən alınan lakkazaların müvafiq olaraq 50 °C-də 1 saat ərzində stabilliyini bildirmişdir. Müxtəlif biotexnoloji sahələrdə tətbiq olunan faydalı biokatalizator kimi, lakkaza geniş temperatur diapazonunda yaxşı stabilliyə və performansa malik olmalıdır.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620-dən alınan lakkazın termostatik stabilliyi (a) və pH stabilliyi (b). Termostatik stabillik ferment məhlulunu müvafiq olaraq 40, 50, 60 və 70 °C-də 2 saat ərzində 0,05 M natrium fosfat buferində (pH 7,0) inkubasiya etməklə qiymətləndirilmişdir. pH stabilliyi ferment məhlulunu 40 °C-də 2 saat ərzində 0,1 M sitrat buferində və Tris buferində (pH 3, 4, 6 və 7) inkubasiya etməklə qiymətləndirilmişdir. Qalıq aktivlik inkubasiyadan sonra substrat kimi ABTS istifadə edilərək hesablanmışdır.
Fermentlərin istifadəsi və saxlanması üçün optimal şərtləri müəyyən etmək üçün pH-ın lakkaza sabitliyinə təsirini araşdırdıq. Müxtəlif pH dəyərlərinə məruz qalma zülal strukturunun sabitliyinə əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərdi və bununla da ferment molekulunun sabitliyinə və aktivliyinə təsir etdi. Nəticələr göstərdi ki, ferment turşu şəraitində daha az sabitdir, daha yüksək pH dəyərlərində (neytral və qələvi bölgələr) isə daha yaxşı sabitlik nümayiş etdirir. 7.0, 6.0, 4.0 və 3.0 pH dəyərlərində 120 dəqiqədən sonra fermentin saxlanma nisbəti müvafiq olaraq təxminən 100%, 62.54%, 52.39% və 11.14% təşkil etmişdir (Şəkil 3b). *Strombus multisus* WRF03 lakkazası neytral pH dəyərlərində daha yüksək sabitlik (5.5–6.5) və turşu pH dəyərlərində daha aşağı sabitlik (4.0-dan aşağı) göstərdi. 5.5, 6.0 və 6.5 pH dəyərlərində 120 dəqiqədən sonra fermentin saxlanma nisbəti müvafiq olaraq təxminən 82%, 100% və 93% təşkil etmişdir.³³Xairin və başqaları⁴²Trametes polyzona WR710-1-dən alınan lakkazanın pH 6.0 ilə 7.0 arasında sabit olduğunu qeyd etdi, Sayed və digərləri isə⁴⁵lakkazanın neytral pH şəraitində daha sabit olduğunu göstərdi. Bununla belə, Cerrena unicolor-dan alınan lakkaza da qələvi şəraitdə sabitlik nümayiş etdirdi (pH 9.0)⁴⁶Tədqiq edilən lakkazalar geniş pH diapazonunda yüksək stabillik göstərmişdir. Bu, sənaye tətbiqləri üçün vacib bir xüsusiyyət ola bilər.
Bəzi metal ionları ferment aktivliyinə həm stimullaşdırıcı, həm də inhibitor təsir göstərdiyindən, onların ferment aktivliyinə təsiri sənaye tətbiqlərində nəzərə alınmalıdır. Bu, çox vacibdir, çünki metal ionları hüceyrədənkənar fermentlərin sabitliyinə və sintezinə təsir göstərə bilən ümumi ətraf mühit çirkləndiriciləridir.⁴⁷*Pleurotus ostreatus* NRC 620-dən alınan lakaza üzərində çoxsaylı metal ionlarının təsirini araşdırmaq üçün müvafiq təcrübələr apardıq. Şəkil 4-də göstərildiyi kimi, istifadə olunan metalın növündən asılı olaraq, metal ion konsentrasiyasının 2,5 mM-dən 10 mM-ə qədər artırılması ferment funksiyasına mənfi təsir göstərmişdir. Məsələn,^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺və^Cu²⁺ferment fəaliyyətini stimullaşdıra və aktivləşdirə bilər, eyni zamanda^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺və^K⁺ferment aktivliyini inhibə edə bilər. 10 mM konsentrasiyasında Cu²⁺ və Mg²⁺ ionları *Pleurotus ostreatus* NRC 620-dən alınan lakkaza aktivliyinin ən güclü aktivatorları idi və müvafiq olaraq təxminən 34% və 20% aktivləşmə dərəcəsi təmin edirdi. Lakin, 10 mM konsentrasiyasında Ca²⁺ ionları lakkazanın ən güclü inhibitoru idi və ferment aktivliyini təxminən 60% azaltdı.
Metal ionlarının Pleurotus ostreatus NRC 620 lakkazasının aktivliyinə təsiri. Lakkaza 2,5 mM və 10 mM konsentrasiyalarında müxtəlif metal ionları olan natrium fosfat buferində (0,05 M, pH 7,0) 10 dəqiqə inkubasiya edildi. Daha sonra reaksiya substratın (ABTS) əlavə edilməsi ilə başladı və bundan sonra nisbi aktivlik ölçüldü.
Nəticələrimiz Mg²⁺ və Cu²⁺-nun *Trametes polyzona* WRF03³ aktivliyini artırdığını aşkar edən digər müəlliflərin nəticələri ilə uyğundur. Castaño və digərləri⁴⁸ müəyyən etmişdir ki, *Xylaria* sp.-dən olan lakkaza müəyyən dərəcədə mis ionları (Cu²⁺) tərəfindən stimullaşdırılır. Bundan əlavə, Foroutanfar və digərləri⁴⁹ və Si və digərləri⁵⁰ müvafiq olaraq *Paraconiothyrium variabile* və *Trametes pubescens*-dən olan lakkazalar üzərində oxşar tədqiqatlar aparmışlar. Bu fermentin II tip mis bağlama yeri (T2) müəyyən bir konsentrasiyada Cu²⁺ ilə doymuş ola bilər ki, bu da daha yüksək Cu²⁺³⁹ konsentrasiyalarında lakkaza aktivliyinin stimullaşdırılmasını izah edə bilər. Ağ çürük göbələklərinin lakazaları çoxlu mis atomu ehtiva edən oksidazalar olduğundan, mis ionlarının lakaza aktivliyinə təsiri müxtəlifdir və stimullaşdırıcı və inhibitordan neytral səviyyəyə qədər dəyişir.⁵¹ Bunun əksinə olaraq, Zhou və digərləri^{. [52]}məlumat verdi ki,^Cu²⁺Tayvan yeraltı termitinin (Odontotermes formosanus) lakkaza aktivliyini inhibə etmişdir. Lakin, Cerena sp. HYB07 lakkazaları^[53]və Clitocybe maxima^[54]mis ionlarından təsirlənməmişdir.
Substratın spesifikliyi onun kinetik parametrləri (Km və Vmax) ilə təmsil olunurdu; substratın fermentə bağlanma affinliyi nə qədər güclü olarsa, Km dəyəri bir o qədər aşağı və substratın spesifikliyi bir o qədər yüksək olar.^3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620-dən əldə edilən lakkazanın kinetik parametrləri (Km və Vmax) GraphPad Prism 6.0 proqram təminatı istifadə edilərək Lineweaver-Burk qrafiki çəkilərək təyin edilmişdir (Şəkil 5). ABTS-i substrat kimi istifadə edərkən nəticələr 1.99 mM və 16217 μmol olmuşdur.^{dəq⁻¹ L⁻¹,}müvafiq olaraq. Elsayed və başqaları.²¹ABTS oksidləşməsi üçün Km dəyərlərinin müvafiq olaraq 0,1 mM və 0,064 mM olduğunu bildirmişdir ki, bu da Lac A və Lac B izoenzimlərinin ABTS üçün yüksək yaxınlığını göstərir. Bundan əlavə, Vmax dəyərləri 0,182 μmol təşkil etmişdir.^dəq⁻¹və 0,603 μmol^dəq⁻¹müvafiq olaraq. Əldə edilən Km dəyəri Trametes polyzona WRF03-dən (8.66 mM) daha aşağı idi; bundan əlavə, onların Vmax dəyəri (1429 mmol min⁻¹) də^aşağıABTS-i substrat kimi istifadə edərkən.33 Eynilə, Lentinus squarrosulus MR13 və Trametes sp. AH28-2 lakkaza konsentrasiyalarının Km dəyərləri müvafiq olaraq 0,0714 mM və 0,025 mM, Vmax dəyərləri isə 0,0091 mM min−1 və 0,67 mM min−1 mq−1 (ABTS-ə nisbətən) təşkil etmişdir.^{müvafiq olaraq.56,57}
ABTS konsentrasiyasının *Pleurotus ostreatus* NRC 620-dən alınan lakkazanın aktivliyinə təsiri araşdırılmış və ilkin reaksiya sürətinin ABTS konsentrasiyasına qarşı əksinin Lineweaver-Burk qrafiki çəkilmiş. Kinetik parametrləri (Vmax və Km) təyin etmək üçün müxtəlif konsentrasiyalı (0,025–3,0 mM) lakkaza ilə ABTS-in oksidləşmə reaksiyası pH 4,5-də ölçülmüşdür. Michaelis-Menten kinetik sabitləri reaksiya sürətinin substrat konsentrasiyasına qarşı əksinin Lineweaver-Burk qrafikindən istifadə etməklə hesablanmışdır. Kinetik sabitlər GraphPad Prism 6.01 proqram təminatından istifadə edərək Lineweaver-Burk qrafikindən hesablanmışdır.
Pektinazalar kimi ənənəvi aydınlaşdırıcı fermentlər pektik maddələri hidrolizə edir, özlülüyü və bulanıqlığı azaldır. Onlar struktur polisaxaridləri effektiv şəkildə parçalayır və məhsuldarlığı və şəffaflığı artırmaq üçün tez-tez sellülazalar və hemisellülazalar kimi digər fermentlərlə birlikdə istifadə olunur. Lakin, pektinazalar, xüsusən də alma və üzüm şirəsi kimi şirələrdə bulanıqlığa və oksidləşdirici qaralmaya əsas səbəb olan fenolik birləşmələri xüsusi olaraq hədəf almır.⁵⁸Bunun əksinə olaraq, lakkazalar fenolik birləşmələrin oksidləşməsini katalizləşdirir və onları çöküntü və ya filtrasiya yolu ilə çıxarıla bilən daha böyük, həll olmayan molekullara polimerləşdirir. Bu mexanizm yalnız şəffaflığı yaxşılaşdırmaqla yanaşı, həm də fenolik birləşmələrin yaratdığı oksidləşdirici qaralma ehtimalını azaltmaqla şirənin raf ömrünü uzadır. Bundan əlavə, lakkaza əsaslı aydınlaşdırma prosesləri mülayim emal şəraitində (pH 3.5–5.5, temperatur 25–40 °C) həyata keçirilə bilər ki, bu da onları qida və ya orqanoleptik xüsusiyyətlərinə xələl gətirmədən zərif şirələr üçün uyğun edir.⁵⁹Tədqiqatlar göstərir ki, pektinaz müalicəsi şirəni 1-2 saat ərzində aydınlaşdıra bilər, lakkaz müalicəsi isə fenol birləşmələrini tamamilə azaltmaq üçün adətən daha uzun reaksiya müddəti (3-6 saat) tələb edir. Lakin bu proses fermenti immobilizasiya etməklə və ya lakkazı mexaniki aydınlaşdırma metodları ilə birləşdirməklə optimallaşdırıla bilər.⁶⁰Bu tədqiqatda xam ekstraktın ferment profilinin müəyyən edilməsi əhəmiyyətli lakkaza və α-amilaza aktivliyini aşkar etdi, pektinaza və ksilanaza aktivliyi isə olduqca aşağı idi və selülaza aktivliyi aşkar edilmədi. Buna görə də, bulanıqlığın və fenol tərkibinin azalması əsasən lakkazanın təsirindən, özlülükdəki dəyişiklik isə qismən amilazanın təsirindən ola bilər.
Cədvəl 1-də təzə sıxılmış alma şirəsi və lakkazla işlənmiş nümunələrin fiziki-kimyəvi parametrləri göstərilir. Nəticələr göstərdi ki, təzə sıxılmış alma şirəsinin məhsuldarlığı (71,59%) lakkazla işlənmiş nümunələrin məhsuldarlığından (87,34%) aşağıdır. Bu nəticələr Pilnik və Orange-ın tapıntıları ilə uyğun gəlir.⁶¹, meyvə emalında fermentlərin istifadəsinin şirə məhsuldarlığını artıra, filtrasiyanı yaxşılaşdıra və konsentrasiya üçün yüksək keyfiyyətli, şəffaf şirə əldə edə biləcəyini göstərən tədqiqatlar. Şirə məhsuldarlığının artması əsasən şirədə həll olan şəkərlərin miqdarının artması ilə əlaqədardır. Meyvələrin fermentativ hidrolizi zamanı məhsulun hüceyrə divarlarındakı mezoglea və pektin maddələri məhv olur və neytral şəkərlər və turşular kimi həll olan maddələrə çevrilir.^62.Fermentlə işlənmiş alma şirəsinin pH dəyəri nəzarət qrupundakından xeyli aşağı idi (P < 0,05) və hər iki qrupun pH dəyəri saxlama zamanı əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır (Cədvəl 1). Bu nəticələr Mark və digərlərinin nəticələri ilə uyğun gəlir.⁶³, istiliklə müalicədən sonra saxlanıldıqdan sonra keşyu meyvə şirəsinin pH-nın azaldığını qeyd etdi. Fermentlə müalicədən sonra pektinin parçalanması və qalakturon turşusunun əmələ gəlməsi saxlama zamanı pH-ın artmasına səbəb ola bilər. Fermentlə müalicə olunmuş nümunələrin pH-ı saxlama müddətində 4.05 ilə 4.31 arasında, emal olunmamış alma şirəsinin pH-ı isə 4.12 ilə 4.33 arasında dəyişdi.
Həm emal olunmamış, həm də lakkazla emal olunmuş nümunələrin ümumi turşuluğu (TA) saxlama müddətinin artması ilə azalma meyli göstərmişdir (Cədvəl 1). Turşuluğun azalması üzvi turşuların karbohidratlara çevrilməsi və ya fermentativ reaksiyalar, eləcə də şirənin saxlanması zamanı oksidləşmə ilə əlaqələndirilmişdir.⁶⁴Nəzarət alma şirəsinin və fermentlə işlənmiş nümunələrin ümumi turşuluğu digər şirələrin ümumi turşuluğundan (çiyələk şirəsi 0,9%, gavalı şirəsi 2,2%, kumquat şirəsi 1,0%, ərik şirəsi 2,4%, portağal şirəsi 0,8%) daha aşağı idi, lakin digər şirələrin turşuluğuna (məsələn, armud şirəsi 0,3%) bənzəyirdi.⁶²Təmizlənməmiş təzə sıxılmış alma şirəsindəki bu fərqlər becərmə şəraiti, genetik amillər, yetkinlik səviyyəsi və emal üsulları kimi müxtəlif amillərdən qaynaqlana bilər.⁶⁵Nəzarət və lakkazla işlənmiş alma şirəsinin ümumi turşuluğunun azalması Sinqh və digərləri tərəfindən təqdim edilən nəticələrlə uyğundur.⁶⁶74 gün saxlandıqdan sonra Jin Nuo alma şirəsinin ümumi turşuluğunun azalması ilə bağlı. Digər tərəfdən, Oshmiansky və Wojdylo⁶⁷ənənəvi aydınlaşdırma metodlarının təsirini öyrənərkən alma şirəsinin turşuluğunda heç bir əhəmiyyətli dəyişiklik aşkar etməmişdir.
Cədvəl 1-də təqdim olunan nəticələr göstərir ki, laksa ilə işlənmiş alma şirəsinin ümumi həll olan bərk maddələrinin (TSS) dəyəri işlənməmiş nümunəninkindən daha yüksək olub. Bu nəticələr dərc olunmuş tədqiqatlarla uyğun gəlir.⁶⁸Bundan əlavə, Cədvəl 1 göstərir ki, nəzarət alma şirəsi qrupunun TSS dəyəri ilkin vaxt nöqtəsində 9,58 idi və saxlama müddətinin sonunda 11,05-ə çatdı. Bu dəyərlər Hamid və digərləri tərəfindən bildirilən təzə alma şirəsinin TSS dəyərlərindən aşağıdır.^{. 69}(müvafiq olaraq 11.2 və 11.80). Lakkase ilə işlənmiş alma şirəsi nümunələrinin TSS dəyəri əhəmiyyətli dərəcədə artaraq 11.23-dən başlayaraq 4°C-də iki həftəlik saxlama müddətindən sonra 12.93-ə çatdı (Cədvəl 1). Saxlama zamanı TSS-də oxşar artım sitrus meyvələrində, limonlarda və şirin portağallarda da müşahidə edilmişdir. Saxlama zamanı ümumi həll olan bərk maddələrin (TSS) artması polisaxaridlərin (nişastanın) monosaxaridlərə (şəkərlərə) hidrolizi, şirənin susuzlaşması səbəbindən konsentrasiyanın artması və şirədəki pektinin həll olan bərk maddələrə parçalanması ilə əlaqəli ola bilər. Ümumi həll olan bərk maddələrin (TSS) artması, ehtimal ki, Hamed və digərləri tərəfindən bildirildiyi kimi, müvafiq olaraq pektin və ya sellüloza tərəfindən həll olan şəkərlərə çevrilməsi və ya nişastanın şəkərlərə hidrolizi ilə əmələ gələ bilən həll olan şəkərlərin artması ilə əlaqədardır.^69.Lakkazanın alma şirəsinin xüsusiyyətlərinə təsiri vizual olaraq müşahidə edilə bilər, çünki lakkaza ilə işlənmiş alma şirəsi emal olunmamış şirəyə nisbətən daha yaxşı axıcılıq və daha aşağı özlülük nümayiş etdirir. Bu müşahidə Cədvəl 1-də qeyd olunur; Fermentlə işlənmiş nümunənin özlülüyü 1,87 cP, nəzarət nümunəsinin özlülüyü isə 2,95 cP idi. Özlülükdəki bu əhəmiyyətli azalma, ehtimal ki, pektin kimi maddələrin daha yüksək su saxlama qabiliyyəti və vahid şəbəkə strukturunun əmələ gəlməsi ilə əlaqədardır.
Bu tədqiqatda, lakkazanın alma şirəsinin qaralma indeksinə (Bİ) təsiri spektrofotometr istifadə edərək 420 nm-də absorbsiyanı ölçməklə araşdırılmışdır. Nəticələr Cədvəl 1-də göstərilmişdir. Saxlama zamanı həm müalicə olunmuş, həm də müalicə olunmamış qruplarda alma şirəsi nümunələrinin Bİ tədricən artan bir tendensiya göstərmişdir. Bİ qaralma dərəcəsini əks etdirir və aşağıdakı kimi xidmət edə bilər:^{vacib bir}fermentativ və qeyri-fermentativ qaralma reaksiyalarının göstəricisi. Saxlama zamanı udma əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır (P < 0.05). Saxlamanın sonunda_A420Nəzarət və fermentlə müalicə olunmuş qruplarda alma şirəsi nümunələrinin dəyəri müvafiq olaraq təxminən 217% və 121% artmışdır (Cədvəl 1). Nəticələr göstərir ki, fermentlə müalicə qaralma dərəcəsini təxminən 56% azalda bilər. Bezerra və digərlərinin nəticələri.^[19]] nəticələrimizlə uyğundur; Onlar alma şirəsini aydınlaşdırmaq üçün lakkaza-qlütaraldehid-hindistan cevizi lifindən istifadə edərək orijinal rəngini 61% azaldıblar.
Meyvə şirələrindəki polifenollar insan orqanizminə müsbət qidalandırıcı və terapevtik təsir göstərsə də, onlar zülallarla reaksiyaya girərək şirənin bulanıqlaşmasına, çöküntü əmələ gəlməsinə və ya bulanıqlaşmasına səbəb ola bilər və bununla da məhsulun dadını və ətrini dəyişdirir və raf ömrünü qısaldır.⁷¹Bu tədqiqatın məqsədi Pleurotus ostreatus NRC 620-dən götürülmüş lakkazdan istifadə edərək alma şirəsinin fenol birləşmə tərkibini təhlükəsiz şəkildə azaltmaq idi. Cədvəl 1-də təqdim olunan nəticələr göstərir ki, lakkazla işlənmiş alma şirəsinin ümumi fenol birləşmə tərkibi 4 °C-də saxlanmadan əvvəl əhəmiyyətli dərəcədə azalıb. Bundan əlavə, tədqiq edilən hər iki nümunədə saxlama zamanı ümumi fenol birləşmə tərkibi də azalıb (Cədvəl 1). Sandri və digərləri tərəfindən aparılan tədqiqat.⁷²fermentlə işlənmiş alma şirəsinin antioksidan aktivliyini və fenol birləşmə tərkibini saxlaya biləcəyini göstərdi. Lakin, Lettera və digərləri tərəfindən aparılan bir araşdırmanın nəticələri.⁷³Portağal suyunun göbələk lakkazası ilə müalicəsinin tərkibindəki fenol birləşmələrinin miqdarını 45%-ə qədər azalda biləcəyi göstərilir.
Fenol birləşmələrinin sərbəst radikalları təmizləmək, tək oksigen reduksiyası və söndürmə, hidrogen atomunun ötürülməsi və sərbəst radikallara elektron bağışlaması kimi xüsusiyyətlərə malik olduğu və bu da onları güclü antioksidantlar halına gətirdiyi göstərilmişdir.⁷⁴Buna görə də, bu tədqiqatda, soyuducuda 14 gün saxlanılan alma şirəsinin antioksidan aktivliyinə lakkazanın təsirini qiymətləndirmək üçün DPPH və FRAP əsaslı metodlardan istifadə edilmişdir (Cədvəl 2). Hər iki metod saxlama zamanı antioksidan aktivliyində artım göstərmişdir ki, bu da sərbəst fenol birləşmələrinin artması və ya Maillard reaksiya məhsullarının (MRP) əmələ gəlməsi ilə əlaqəli ola bilər və Maillard reaksiya məhsulları, ehtimal ki, antioksidan aktivliyin artmasının səbəbidir.⁷⁵Qeyri-fermentativ qaralma reaksiyaları (askorbin turşusunun parçalanması, Maillard reaksiyaları və şəkərlərin turşu ilə katalizləşdirilmiş parçalanması daxil olmaqla) qəhvəyi piqmentlər (melanoidinlər) əmələ gətirir. Aralıq askorbin turşusunun parçalanma məhsulları və şəkərin parçalanma məhsulları (məsələn, karbonil birləşmələri) Maillard reaksiyaları vasitəsilə amin turşuları ilə reaksiyaya girə bilər.⁷⁶Meyvə və tərəvəzlərin saxlama zamanı qəhvəyi rəngə çevrilməsi geniş şəkildə araşdırılsa da, bu reaksiyalar haqqında anlayışımız məhdud olaraq qalır.⁷⁷FRAP metodu ilə müqayisədə, lakkazla işlənmiş alma şirəsi DPPH metodu ilə əhəmiyyətli dərəcədə aşağı antioksidan aktivlik göstərmişdir (Cədvəl 2) və bütün nümunələrin antioksidan aktivliyi saxlama müddəti artdıqca əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır. Bu tədqiqatda antioksidan aktivliyi təyin etmək üçün iki fərqli metoddan istifadə edilmişdir, çünki onların prinsipləri fərqlidir. DPPH metodu sərbəst radikalları neytrallaşdırmaq qabiliyyətini, FRAP metodu isə dəmir ionlarını azaltmaq qabiliyyətini ölçür. Buna görə də, tədqiq olunan nümunələrin antioksidan aktivliyini daha yaxşı başa düşmək üçün antioksidan aktivliyi təyin etmək üçün birdən çox metoddan istifadə etmək tövsiyə olunur.⁷⁸
Bu tədqiqatın əsas tapıntılarından biri də *Pleurotus ostreatus* lakkase NRC 620-nin 70°C və pH 3.0-da optimal aktivlik nümayiş etdirməsidir. *Trametes versicolor* və *Ganoderma lucidum* lakkaseləri kimi şirəni aydınlaşdırmaq üçün geniş istifadə olunan digər göbələk lakkaseləri ilə müqayisədə *P. ostreatus* NRC 620 daha yüksək istilik stabilliyi və daha turşulu pH nümayiş etdirir. *Trametes versicolor* və *Ganoderma lucidum*-dan alınan lakkaselər adətən 50-60°C aralığında və 3.5 ilə 5.0 arasında pH dəyərlərində optimal aktivlik nümayiş etdirir. Bu fərq, xüsusən də aşağı pH dəyərlərində stabilliyin vacib olduğu turşulu şirələr üçün şirənin aydınlaşdırılmasının səmərəliliyinin artmasına kömək edə bilər. *P.-nin unikal xüsusiyyəti. Digər tədqiq olunan göbələk lakkaseləri ilə müqayisədə *Pleurotus ostreatus* NRC 620 daha çətin şəraitdə effektiv fəaliyyət göstərmək qabiliyyətini nümayiş etdirir. Onun daha yüksək optimal aktivlik temperaturu sənaye tətbiqlərində potensial üstünlükləri, məsələn, daha sürətli reaksiya sürəti və mikrob çirklənməsinin azalmasını göstərir. Bir çox şirənin turşu təbiətinə yaxşı uyğun olan aşağı pH-ı şirənin təmizlənməsi proseslərində faydalı ola bilər. Bu nəticələr genişmiqyaslı tətbiq üçün daha çox araşdırma aparmağı əsaslandırır və *Pleurotus ostreatus* NRC 620-ni ənənəvi göbələk lakkaz mənbələrinə alternativ edir. Əvvəlki tədqiqatlarla müqayisədə optimal temperaturun 60°C, optimal pH-ın isə 3.0 olduğunu aşkar etdik. 60°C-də 80 dəqiqə reaksiyadan sonra *Ganoderma lucidum* lakkazı saxlanılıb.⁴⁶fəaliyyətinin %-i.79 Kurniavati və Nicelle görə⁸⁰, *Ganoderma lucidum* fermentləri 25°C-də və pH dəyərləri 5.0-dan 8.0-a qədər, pH 6.0-da və 10-dan 30°C-yə qədər olan temperaturlarda əla və orta dərəcədə stabillik nümayiş etdirir. Bu tədqiqatda, *Pleurotus ostreatus* üçün ferment aktivliyi üçün optimal pH və temperaturun müvafiq olaraq 3.0 və 70°C olduğunu aşkar etdik. İki saat ərzində 40°C və 50°C-də inkubasiyadan sonra ferment aktivliyinin müvafiq olaraq 68.33% və 59.61%-ni saxladı. Bundan əlavə, Pleurotus ostreatus NRC 620 lakkasesi 50°C-dən 80°C-yə qədər geniş temperatur diapazonunda yüksək aktivlik nümayiş etdirdi və demək olar ki, maksimum aktivliyə (69%-98%) çatdı, maksimum aktivlik isə 70°C-də müşahidə edildi.
Nəticə olaraq, statik şəraitdə əldə edilən istiridyə göbələyi lakkase NRC620, digər ferment mənbələri ilə müqayisədə üstün stabillik nümayiş etdirərək, müxtəlif pH və temperatur şəraitində optimal aktivlik və stabillik nümayiş etdirdi. 10 mM MgSO₄ və CuSO₄ əlavə edilməsi ferment aktivliyini müvafiq olaraq təxminən 21% və 35% artırdı. Alma şirəsinə çevrildikdə, ferment pH və özlülüyü azaltdı, fenol tərkibi isə saxlama zamanı yalnız bir qədər azaldı.
Nəticələr, xüsusilə də içkilərin təmizlənməsi sahəsində lakkazın qida sənayesində potensialını təsdiqləyir. Xüsusilə fenolik birləşmələri parçalayaraq, lakkaz yalnız bulanıqlığı azaltmır və şəffaflığı artırır, həm də yumşaq iş şəraitində meyvə şirələrinin keyfiyyətini qoruyur. Jelatin, bentonit və silika jeli kimi ənənəvi təmizləyici maddələrdən fərqli olaraq, lakkaz tullantı yaratmır və ya içkilərdən xoş ətirləri təmizləmir, bu da onu daha ekoloji cəhətdən təmiz və davamlı bir seçim halına gətirir. Bundan əlavə, digər fermentlər və filtrasiya üsulları ilə müqayisədə lakkaz məhsulun keyfiyyətindən ödün vermədən hədəflənmiş və səmərəli bir həll təklif edir.
Kyomuhimbo, HD və Brink, HG. Mis tərkibli lakkazaların tətbiqi və immobilizasiya strategiyaları; icmal. Heliyon 9, e13156 (2023).